传染病实习报告.docx

实习报告
一、 实习目的
1、 通过对雏鸡接种未知的细菌和病毒，待鸡发病后进行病理剖检和细菌病毒的分离, 掌握临床诊断、病理剖检和实验室试验相结合，同时掌握对一般传染病进行诊断，确 定感染的细菌和病毒种类；
2、 掌握传染病基本临床诊离培养：对于病变明显的脏器无菌分离细菌，划线接种伊红美蓝和麦康凯 平板。用点燃的酒精棉在肝脏表面消毒，然后在酒精灯上加热手术刀片，趁热用刀片 在肝脏表面划一切口，用灭菌接种环伸入切口的组织内。划线接种在麦康凯、伊红美 蓝琼脂平板上，37°C培养24h后观察。
5、 病料处理：采集病变的脏器(脾脏、法氏囊)放入小青瓶，用剪刀粗略剪碎，力叶BS 缓冲液至不超过2/3小青瓶量，转移到匀浆器，匀浆，将红色匀浆液倒回小青瓶，标 记，冻融3次。
周二(5月29日)
1、鸡胚接种：
制作病毒液：将昨天冻融备用的小青瓶中的混合脏器研磨液解冻，将上层透明红 色液体装入EP管中，6000r/min，离心10min。取上清液，用小滤器() 过滤入灭菌的小青瓶中。此操作严格在超净工作台完成，以免有细菌污染，导致试验 失败。
照蛋：通过照蛋选取5个活的7-10日龄的SPF鸡胚，避开血管，画出即将打孔 与相应气室处的两点位置。
打孔：碘酊和酒精消毒后用打孔器在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室处和气室下 的无血管处各钻一小孔。
尿囊腔接种：针头从气室下的小孔处插入，，即已穿过了外壳膜且距胚 胎有半指距离，~。(如图1)
封孔：点燃酒精灯融化石蜡，用小刷子沾取少量石蜡涂布在两个小孔上，注意先 封气室下沿的孔再封气室处的孔，等待其凝固后，置孵育箱中直立孵育。每24h后， 每天照蛋1次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入 冰箱冻死。死亡的鸡胚置冰箱中1-2h后即可取出收毒并检查鸡胚病变。
图1尿囊腔接种
2、细菌的观察:
肉眼观察麦康凯和伊红美蓝平板上分离细菌的菌落形态，颜色、大小是否一致。
3、 细菌的染色：
在玻片上滴加一滴生理盐水，然后分别挑取可疑菌落，涂布玻片，进行革兰氏染 色，观察细菌染色特征，同时与将昨天涂布且自然干燥好的组织触片染色镜检，将两 个细菌进行比较，观察其是否为同一细菌。
革兰氏染色方法：火焰固定-滴加草酸铵结晶紫溶液，l~2min -水洗一滴加革 兰氏碘液1~3min —水洗—95%酒精脱色，〜lmin —水洗—石炭酸复红（沙 黄水）10~30s —水洗一干燥一镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈 红色。
4、 细菌纯培养：
取两块SS琼脂平板，挑取经染色后初步鉴定的细菌的典型菌落接种到平板上进行 纯培养。
5、 液体细菌增殖培养：
取装有氯化镁孔雀绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、LB液体培养基的试管，一 种细菌接种一套。
6、 10%的鸡红细胞制备
在注射器内事先加入枸盐酸钠1ml （抗凝剂与血液按1： 4比例使用），抽取1只成 年无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液4ml。将血液放入离心管内，与等体积PBS 稀释液混合至离心管刻度线10ml处，于离心器内2000r/min离心5min后，弃去上层 透明血浆和白细胞层，继续加PBS稀释液至10ml离心进行红细胞的洗涤。重复3次洗 涤后用10倍PBS稀释液配成10% （V/V）红细胞悬液。4°C保存备用。
周三（5月30 日）
1、 照蛋观察鸡胚：死亡的淘汰，没死的继续培养。
2、 观察SS琼脂平板菌落的形态及颜色，并记录。
3、 观察LB液体培养基、氯化镁孔雀绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液中细菌增长情 况。
4、 药敏试验：取两块LB平板，分别用胶头吸管吸取LB液体培养基中的液体两滴，玻 璃推棒均匀涂布在LB平板上。将抗菌药物圆纸片均匀贴于培养基表面，各片距离应相 等。其中一块平板为：氨苄西林、哌拉西林、麦迪霉素、氨曲南、链霉素、氧氟沙星、 头抱曲松；另一块平板为卡那霉素、妥布霉素、链霉素、氧氟沙星、氨曲南、头抱吡 肟、头抱他啶。37°C培养24h观察结果。
5、 细菌生化鉴定：将所有生化管中的液体都甩向一侧，然后用砂轮在生化管上端约1/3 划痕，折断。然后用灭菌接种针取纯菌接种至硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡磷 胨水、枸橼酸盐、尿素、半固体、赖氨酸、鸟氨酸、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖靛 基质、氨对14根生化管中。倒置在小烧杯中37°C培养24~48h,观察发酵管的反应情 况，并记录结果。
糖类(山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖和棉子糖)分解试验：
原理：接种细菌若发酵某种糖或醇，可产酸，使培养液颜色由紫色变为黄色；如发酵 的同时又产生气体，培养液颜色由紫色变为黄色的同时，在微量发酵管顶部积有气泡。 结果