MS营养液装备方法.doc

孢子的采集收集用于播种的孢子必须是成熟的孢子,采集孢子的最佳时期是孢子裹盖逐渐变褐、变黑, 边缘开始翻卷时, 一般采集中、下部的孢子。采集时摘下有成熟孢子的叶, 将其放在白色的塑料袋中保存在温暖干燥的环境下, 5-7d 就会有孢子在孢子裹破裂后弹出。注意采集时,勿混杂其他蕨类植物孢子,保持叶片干净。采集孢子后可用信封或干净纸袋进行收集, 并编上号,注明种类、采集地点、采集人、采集日期等。放于 4℃的冰箱中保存。 10. 培养基的配制 MS 培养液配方及配制方法 1. 大量元素( 母液Ⅰ) mg/L NH 4 NO 3 33000 KNO 3 38000 CaCl 2· 2H2O 8800 MgSO 4· 7H2O 7400 KH 2 PO 4 3400 2. 微量元素( 母液Ⅱ) KI 166 H 3 BO 3 1240 MnSO 4· 4H 2O4 460 ZnSO 4· 7H 2O1 720 Na 2 MoO 4· 2H 2O 50 CuSO 4· 5H 2O5 CoCl 2· 6H 2O5 3. 铁盐( 母液Ⅲ) FeSO 4· 7H 2O5 560 Na 2 -EDTA · 2H 2O7 460 4. 有机成分( 母液Ⅳ)ⅣA 肌醇 20000 IVB 烟酸 100 盐酸吡哆醇( 维生素 B 6) 100 盐酸硫胺素( 维生素 B 1) 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量, 除了母液Ⅰ为 20 倍浓缩液外, 其余的均为 200 倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成 1L 的贮备液。其中, 母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是: 每种母液中的几种成分称量完毕后, 分别用少量的蒸馏水彻底溶解, 然后再将它们混溶,最后定容到 1L。母液Ⅲ的配制方法是:将称好的 FeSO4 · 7H2O 和 Na2-EDTA · 2H2O 分别放到 450 mL 蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将 pH 调至 5 ·5 ,最后定容到 1L ,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后, 分别用玻璃瓶贮存, 并且贴上标签, 注明母液号、配制倍数、日期等, 保存在冰箱的冷藏室中。 2, 4-D 、 NAA 、 6-BA 等植物生长调节物质母液,配置方法:分别称取这 3 中物质各 10mg ,将 2,4-D 和 NAA 用少量( 1ml )无水乙醇预溶,将 6-BA 用少量( 1ml )的物质的量浓度为 的 NaOH 溶液溶解, 溶解过程需要水浴加热, 最后分别定容至 100ml ,既得质量浓度为 的母液。配制 MS 培养基时, 取母液Ⅰ 50ML , 母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA、ⅣB各 5ML , 再取 2,4-D 5ml , NAA 1ml , 琼脂粉 20g , 蔗糖 50g 溶解于 1000ML 烧杯中, 加热溶解配制成 MS培养基。优化:培养基中可加入 4mg/l 的雷多米尔溶液按雷多米尔溶液:培养基=1:10 的比例添加。灭菌:将培养基分装到培养瓶中(每瓶约 50ML ), 培养基经 121 ℃高压灭菌 10 min , 取出, 冷却, 待用~! 灭菌前可加适量蕨类提取物, 如黄酮, 槲皮素等, 可大大增加孢子萌发率。 3. 孢子的灭菌及接种设备的灭菌取漏斗, 放如滤纸, 用超纯水润湿。将孢子置于其中, 加