一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用的制作方法.docx

一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用的制作方法
一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用的制作方法
一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法，该荧光探针的分子结构式为：制备步骤是：首先以4-二乙胺基水杨醛、丙二物质或其混合物共存时具有肉类风味；GSH可抑制肉食类、鱼类和 海鲜类食品的核酸分解，延长保鲜期以及提高奶酪质量，防止酪蛋白褐变。
[0004] 由于谷胱甘肽具有重要的生理功能和广泛应用的市场前景，因此，谷胱甘肽的工 业化生产和检测越来越受到关注。
[0005] 香豆素及其衍生物广泛存在于植物中，具有明显的生物活性，在医药方面已有很 多报道，如，对人体具有抗氧化、降血糖、抗菌和抗癌等多种药理作用；同时，其还是一种具 有强烈荧光性能的化合物，在荧光探针方面的报道在国内还不多见。香豆素类化合物是典 型的内酯结构，其发色团是内酯环，通过其内酯结构使二苯乙烯化合物中双键被同定为 反式，使得双键的旋转被阻抑起来，提高其光稳定性，从而使得原来荧光量子效率较低的二 苯乙烯化合物转变为量子效率较高的香豆素化合物，避免了二苯乙烯化合物在紫外光照射 下顺-反式的相互转化，致使这类化合物具有很高的光量子稳定性及光致发光量子效率， 因而可广泛应用于荧光染料和荧光探针的检测。
[0006] 荧光分子探针由于其灵敏度高，选择性好，检测成本低，可实现细胞内定位等优 势而倍受关注，已广泛应用于生物医学、环境检测等领域。本发明设计和合成的小分子荧 光探针，可将其应用于还原型谷胱甘肽的分析检测。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是针对还原型谷胱甘肽的分析检测，提供一种具有高选择性和高灵 敏性的识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用。
[0008] 本发明的技术方案： 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法，该荧光探针的分子结构式为：
【权利要求】
1. 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法，其特征在于：该荧光探针的分子 结构式为：
制备步骤如下： 1) 将4-二乙基氨基水杨醛和丙二酸二乙酯溶解在乙醇中，加入哌啶，90 °C回流4-5 h，冷却至室温，蒸去乙醇，加入18wt%的稀盐酸溶液回流10-12h，冷却至室温加入饱和乙 酸钠溶液，用饱和NaOH溶液调节pH至4-5,有固体析出，抽滤后固体用蒸馏水洗涤三次，滤 饼干燥后用无水乙醇重结晶，得浅黄色的7-N，N-二乙基氨基香豆素； 2) 将？0(：13逐滴加入DMF中，在0 °C下反应30min，然后逐滴加入7-N，N-二乙基 氨基香豆素-DMF混合液，在60 °C下反应12-14h，然后冷却至室温，倒入冰水中搅拌 1-2h，有固体析出，抽滤后用蒸馏水洗涤三次，滤饼干燥后用无水乙醇重结晶，，得桔黄色 的7-N，N-二乙基氨基香豆素-3-甲醛； 3) 将对甲酰基苯甲酸甲酯和二甘醇胺加入无水乙醇中，室温下搅拌5h后，将三乙酰 氧基硼氢化钠分三次加入到反应体系中，TLC检测反应进程，待反应完全后，加入蒸
馏水， 三乙酰氧基硼氢化钠与蒸馏水的质量比为3:4. 5-5. 5,用二氯甲烷萃取、浓缩、干燥后，得到 油状化合物（I) 4-N- [ (2-乙氧基）乙醇甲氨基]苯甲酸甲酯； 4) 将化合物（I)和80wt%的水合肼加入无水乙醇中，回流反