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一种新型高效的蛋白酶活性检测方法
专利名称：一种新型高效的蛋白酶活性检测方法
技术领域：
本发明涉及功能纳米材料和生物化学领域，具体涉及一种新型高效的蛋白酶活性检测方法，本发明通过蛋白酶对多肽底物的酶切反应，用所得的酶切产物作为表面配法由以下步骤组成:
第一步，设计多肽底物
针对被检测的蛋白酶种类，设计一段与所述第一部分的第一步中相同的多肽底物； 第二步，进行酶切反应
设计好多肽底物后，在被检测的蛋白酶的最适温度以及最适PH值条件下，向多肽底物中投入未知浓度的被检测蛋白酶，然后进行酶切反应，得到酶切产物；其中，酶切反应的时间与所述第一部分的第二步中酶切反应时间相同，所述多肽底物的量与所述第一部分的第二步中多肽底物的量相同；
第三步，合成量子点
向第二步中的酶切产物中投入用于合成量子点的所述第一部分的第三步中的前驱体，并在与所述第一部分的第三步中相同的温度以及时间条件下反应，结束后生成量子点，其中，投入的所述前驱体中金属离子和非金属离子的量与所述第一部分的第三步中前驱体中金属离子和非金属离子的量相同；第四步，获得被检测的未知浓度的蛋白酶的活性
对第三步中生成的量子点进行荧光光谱测定，得到该量子点的荧光光谱波峰强度，再将该荧光光谱波峰强度与所述第一部分中得到的相关关系进行比对，最终获得被检测的未知浓度的蛋白酶活性。上述技术方案中的有关内容解释如下:
1、上述方案中，多组已知浓度的蛋白酶中的最高浓度为所述多肽底物摩尔浓度的
%，酶切反应的时间小于或等于所述第一部分的第二步中最高浓度的蛋白酶100%酶切多肽底物的时间，也就是说当已知不同浓度的蛋白酶与相同量的多肽底物进行酶切反应时，若最高浓度的蛋白酶还没有与多肽底物反应完，那么其他低浓度的蛋白酶就一定没有与多肽底物完全反应，则由已知不同浓度的蛋白酶与相同量的多肽底物进行酶切反应生成的酶切产物的量不同，进而用酶切产物合成的量子点的荧光光谱波峰强度也不同。2、上述方案中，所述最适温度是指酶促催化反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度，最适PH是指酶催化活性最高时溶液的pH值，pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。每一种蛋白酶都有各自的最适温度以及最适pH，本领域普通技术人员能够容易得到每一种蛋白酶的最适温度以及最适pH。3、上述方案中，在所述第一部分的第二步与所述第二部分的第二步中，所述pH值采用PH缓冲溶液来调节，pH缓冲溶液选自三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液(又称Tris-HCl缓冲溶液)、碳酸氢氨缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液(又称PBS缓冲溶液)中的任意一种； %的血清， 1% 。本发明设计原理是:量子点(英文名称quantum dots, QDs)是一种尺度小于或者近似激子波尔粒径的半导体纳米晶体，具有独特的光学性质，比如激发谱宽而连续分布，发射波长可通过粒径大小和组成成分进行调节，荧光量子产率高，寿命长，因而在荧光标记成像，发光器件，光电材料等领域有着广泛的应用前景。采用含巯基的氨基酸或多肽制备量子点的方法也已十分成熟，如Wing-Cheung Law采用半胱氨酸(英文名称L-cysteine)合成CdTe量子点，Ying-Fan Liu采用