丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响.doc

丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响.doc丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响
作者:李海峰程琳乔振江常宝
【摘要】目的:探讨丝裂霉素对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶(Glutathione Strans ferase,GSTπ)表达的影响。方法:利用人胃癌细胞株BGC823进行培养,加入丝裂霉素后5h和10h后采集细胞,进行免疫组化染色。结果:5h组,胞质中GSTπ含量下降,胞核中GSTπ增多;10h组其胞质与胞核中仍有少量GSTπ表达。结论:丝裂霉素对BGC823癌细胞有明显的杀伤作用,其途径之一可能与抑制GSTπ基因表达有关。
【关键词】丝裂霉素;胃癌;谷胱甘肽转移酶;免疫组织化学
【ABSTRACT】 Objective:To study the killing function of mitomycin on gastric cancer cells and the expression of GSTπ. Methods: As human gastric cancer cells itomycin icroscope and transmission electron microscope after staining munohistochemical : The morphology of gastric cancer cell embrane and nuclear. Conclusion:Mitomyclin has a killing fuction to gastric cancer cells, one of manners ycin;Gastric cancer;GSTπ;Immunohistochemical method
化学治疗是对恶性肿瘤综合性治疗的一部分,丝裂霉素是临床常用的抗癌药之一,其作用效果临床已有报告,而对其作用途径,尤其是它对重要酶系的影响,尚未见报告。本实验采用细胞培养技术和免疫组织化学技术,观察丝裂霉素(Mitomycin,MMC)对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶(胎盘型,简称GSTπ)的影响,为探讨丝裂霉素的抗癌机制提供科学依据。
1 材料和方法
11 材料丝裂霉素注射液(Mitomycin for injection)由浙江省海正药业股份有限公司生产(批号040901)。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供;二氧化碳培养箱和RPMI1640培养液由实验中心提供。兔抗人GSTπ抗血清及SP试剂盒由北京中山生物技术公司提供。
12 方法将5×104浓度的BCG823细胞接种于无菌96孔板和6孔板中,培养24h。在6孔板中加入无菌盖玻片,使癌细胞附壁生长(爬片)。对照组不加入药物,实验5h组,即加入MMC15μl(00075mg),培养5h后收获,实验10h组则加药后培养10h。然后将培养液中细胞离心,25%戊二醛前固定。将附壁爬片的癌细胞培养液中分别加药5h、10h后取出盖片,用4%多聚甲醛固定,常规洗涤和SP免疫组织化学染色。其操作程序按试剂盒说明书进行。阴性对照PBS代替
Ⅰ抗,阳性对照为已知人胃癌组织切片。
13 统计学处理利用彩色图象分析仪软件进行图象分析。每组随机计数100个癌细胞,以灰度表示着色深浅(深者灰度值低,浅者灰度值高)。借助SPSS软件进行方差分析,然后进