SOD测试方法.docx

SOD体外活性测定方法：化学发光法化学发光免疫测定法紫外分光光度计电子自旋共振（ESR）光谱法脉冲辐解法电泳法
化学发光法（实验室法）
原理：在有氧条件下，黄嘌呤氧化酶能催化黄嘌呤或次黄嘌呤生成尿酸和O2，O2可与化学发光剂鲁米诺或海莹SOD体外活性测定方法：化学发光法化学发光免疫测定法紫外分光光度计电子自旋共振（ESR）光谱法脉冲辐解法电泳法
化学发光法（实验室法）
原理：在有氧条件下，黄嘌呤氧化酶能催化黄嘌呤或次黄嘌呤生成尿酸和O2，O2可与化学发光剂鲁米诺或海莹莹光素诱导剂反应，使发光剂被激发到激发态，而它返回基态时便会向外发光即化学发光，SOD能抑制发光剂化学发光，根据其抑制程度可测得SOD活性。
测定方法：于25°C条件下，,lmmol/L的EDTA-,lmmol/,5pmol/，测试管中再加入10Ml待测样本（对照管中以10pL生理盐水替代），放入发光仪测试室，最后加入100pl黄嘌吟氧化酶应用液以启动反应，立即开启脚踏开关或自体起始开关开始测定，仪器自动记录并打印样本，及时照管发光强度值。酶活性单位为特定试验条件下，抑制50%发光强度时的酶浓度。
该法时间响应快、灵敏度高、专一性强、分析精确、样品用量少，但需要高灵敏度的精密发光测量仪器，因此在临床推广中受到限制。
化学发光免疫测定法（实验室法）
原理：把发光剂如鲁米诺及其衍生物N-氨基丁基-N-乙基鲁米诺（ABEI）加入到一个免疫反应体系中，取代放射性同位素，最终以发光强度来计算表征待测物质的量。
测定方法：测定管中含标记CuZn-SOD，1：4000稀释的免抗CuZn-SOD的抗血清和样品或标准品各100pL,特异性结合管中含标记CuZn-SOD，稀释的免抗CuZn-SOD的抗血清和稀释液各100pL,非特异结合管中则只含100pL标记CuZn-SOD，再稀释至300pL，然后各管均加入500pL分离剂，充分混合，4C放置过夜，2000xg离心20min,弃去上清夜，用2mol/LNaOH200pL溶解沉淀，在50C保温3h,取出置室温平衡后，加氧化血红素液800pL,充分混匀，用原位加样器加入H2O2200pL,起动反应，进行发光测试，根据发光峰与标准曲线比较，即可计算出SOD含量。
用发光剂取代放射性同位素的优点是避免了入射性污染，标记物可长期保存，而在灵敏度和特异性上均可与放射性免疫测定相媲美。
另夕卜，HylandKI等建立了碱性二甲基亚砜法；RichardER以及龚国清等建立了碱性二甲基亚砜发光法；翁元凯基于碱性水溶液中电对SO3（2-）/S2O4（2-）和O2/O2标准电极电势的不同，以鲁米诺为发光剂，建立了产生O2的氧饱和碱性连二亚硫酸钠法，通过检测SOD抑制化学发光的程度计算SOD活性。
紫外分光光度计（企业仪器）
原理：物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判