氨基酸纸层析.ppt

2017/9/28
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实验一氨基酸纸层析
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1、通过氨基酸的分离,学习并掌握纸层
析的原理和操作技术;
2、掌握分配层析法;
3、掌握影响分配系数的因素。
一、实验目的:
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层析技术(chromatography 色谱技术)
一、发展史:
层析分离技术在20世纪初就已得到应用:
1903年用于植物色素的分离,各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开,由此得名为“色谱法”
1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体;
1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析;
20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。
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二、定义
层析技术是根据被分离的混合物中各组分的理化性质(分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分在两相(一相为固定的,称为固定相;另一相流过固定相,称为流动相)中进行分配。
层析的基本概念
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固定相:固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等),也可以是液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液)。
流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等,都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。
层析的基本概念
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三、层析技术的种类
1、按流动相的状态分类:
(1)液相层析(色谱) (2)气相层析(色谱);
2、按固定相的使用形式分类:
(1)柱层析(2)纸层析(3)薄层层析;
3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类:
(1)吸附层析(2)分配层析(3)离子交换层析
(4)凝胶层析(5)亲和层析等。
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纸层析法:是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。
滤纸纤维上羟基具有亲水性,因此吸附水作为固定相,通常把有机溶剂作为流动相。
将样品点在滤纸上,进行展层,样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来,形成距原点不等的层析点
二、实验原理:
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分配层析法:
利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同,而达到分离目的的一种实验方法。在一定条件下,一种物质在某种溶剂系统中的分配系数α是一个常数。
溶质在固定相的浓度(Cs)
分配系数α=
溶质在流动相的浓度(Cl)
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溶剂系统: 正丁醇:甲酸:水=15:3:2
固定相:水和滤纸纤维素有较强的亲和力,因而其扩散作用降低形成固定相;
流动相:有机溶剂和滤纸亲和力弱,所以在滤纸毛细管中自由流动,形成流动相。
由于混合液中各种氨基酸的α值不同,所以移动速率(即迁移率Rf值)就不同,从而达到分离的目的。
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移动速率(比移值):
原点到层析点中心的距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离