实验三 红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数--上课用.ppt

红细胞计数
(一)原理
用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后,于显微镜下计数。
(二)试剂与器材
Hayem液(氯化高汞、氯化钠、结晶硫酸钠)
血细胞计数板
(三)操作
2ml稀释液+10ul血液,洗涤,振荡,混匀,充池,高倍镜计数中央大方格周围四个及中央五个中方格内细胞总数。
(四)计算
细胞数/5×25 × 10 × 200 ×106 =细胞数/100 ×1012/L
(五)质量保证
;
; ,充液不当

,红细胞易聚集。
(六)临床意义
1、增多
(1)相对性增多
(2)绝对性增多
(3)真性红细胞增多症
2、减少
(1)造血物质减少(2)红细胞破坏过多
(3)红细胞丢失过多(4)骨髓造血功能衰竭
3、红细胞计数和血红蛋白测定的关系
二、血红蛋白测定(法)
(一)原理
血细胞经血红蛋白转化液溶血后,除SHb外,其他血红蛋白均被高铁氰化钾氧化成Hi,与CN—结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白。它的最大吸收峰在540nm,测定A,得血红蛋白浓度。
(二)试剂、器材
文齐氏液、721分光光度计
(三)操作
5ml血红蛋白转化液+20ul血液,振荡,混匀,5min后721分光光度计上测定。波长540nm。转化液调零,1cm比色杯。
(四)结果报告
1. A/44 /1 ×64458/1000 ×251=A ×(g/L)
2..标准曲线法测定参考标准品的A值,以Hb浓度为横坐标,A值为纵坐标,绘制通过零点的曲线,查表。
3. K值法: K=Hb总和/A值总和
Hb浓度= A ×K
(五)质量保证
,白细胞异常增多,SHb疾病时,测定液体发生浑浊,可增加NaCl,消除影响。

每升加次氯酸钠35ml,敞开过夜。
CN-氧化成CO2和N2,或水解CO32-和NH4+。
3、对分光光度计相关参数的校正。
(六)方法学评价
该方法结果稳定可靠,操作简便,为标准方法,但有一定毒性。除了该方法外,还有SDS-Hb法和沙利氏法等,但SDS本身质量差异大,摩尔消光系数、标准液有待研究,为次选方法。沙利氏法误差大,已经被基本淘汰。