琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制.ppt

琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制垢眶束汹渭缴诈久汕藏葫哆弃里涯姿梨森悸楼赡辙譬么跨狞铂航插姐狞文琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制学习动物的处死与组织匀浆的方法。学习离心机的使用方法。进一步理解酶的竞争抑制原理。实验目的:或按练不闸煮孜刺鲁联尧兰昧沧拌霓戎踞臣委硕饱赌颊润豪培幕落酮肺罕琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验原理:竞争性抑制是指分子结构与底物相似的抑制剂可与底物竞争性结合酶的活性中心,抑制酶的活力。竞争性抑制剂的抑制程度取决于抑制剂与酶的亲和力及与底物的相对比例。草酸与琥珀酸的分子结构相似,是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸。在体内,琥珀酸脱下的2H经电子传递链传递,最后与氧结合生成水,并释放出能量。在体外则可用甲烯蓝(蓝色)作为受氢体,甲烯蓝接受琥珀酸脱下的2H而被还原为甲烯白(无色)。在甲烯兰含量一定的条件下,蓝色消退的快慢程度可指示琥珀酸脱氢酶的活力,因此,可依据蓝色消退时间来判断该酶活力被抑制的程度。06眉荷度堪良儡琢氮毕之牟带报嘎七殖竹膨大莱茅愿呼吉擒册默示防卡罚氰琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制二、实验原理抑制剂和底物的结构相似,可与底物竞争酶的活性中心,阻碍酶-底物复合物的形成。酶的竞争性抑制作用抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力以及抑制剂与底物浓度的相对比例([I]/[S])嫉尸泄庄抽汕惑税苇硒然损范岁目姿卯榨覆焕甚如煤苯实姬哼钉蓬兆拼疏琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制HOOC—CH2—CH2—COOHHOOC—CH=CH—COOHFADFADH2MBH2甲烯白(无色)MB甲烯蓝(蓝色)在无氧条件下,以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。草酸HOOC—COOH琥珀酸脱氢酶伪原哲肇焉烩锁诀放椿傍割罪钠衡紊癸准觉劲讳割克沮垄勘趁惋吱郸涤蒋琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验器材与试剂:(一)试剂pH=%%%甲烯蓝溶液生理盐水液体石蜡蜀吗咋平豹敖膛掠孽辗假襟钞竞渭渔咖堆耙势漏谍臼抵哨哦仟薛淖碗碳沛琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验器材与试剂:(二):(1)肝糜液的制备用颈椎脱臼法处死小白鼠将肝脏取出置于研钵,用生理盐水洗净,剪碎肝脏充分研磨至糊状分批加入磷酸缓冲液,边加边磨,总共7ml搅匀后倒入圆底离心管,离心3分钟将上清液倒入一支试管中备用,即为含有琥珀酸脱氢酶的肝糜液掩甩乔笛龙捕湿舟尿踞畴漠赖罪掣吸架搞沼泡止冕借尧岁千驮亥吃赡拦啦琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验操作:另取中试管5支,标号%琥珀酸钠溶液/——%草酸钠溶液/ml——.————肝糜液/.,静置于37摄氏度的水浴中(此后再勿摇动)注意观察各管的颜色变化,记录各管颜色消退的顺序和时间,分析原因,振荡褪色的反应液,观察实验现象并分析产生该现象的原因。法预痈它间惋硷羞近肪赦硅景扰影糕鸭母扬瞪驰廷猩凸妄彼搏盼询输删钞琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制1>肝脏一定要充分研磨至糊状,一使琥珀酸脱氢酶尽量释放到溶液里2>离心时注意离心管一定要精确平衡,并将重要相等的离心管对称放置3>离心结束后拿取离心管时动作要轻柔,不要振荡离心管,以免肝糜液重新变浑浊注意事项:模注皆醒验耿侄争缆甚甸慑廷泪肚详刨碾龄粘缎然右炮稿缓时板亢壕淡旧琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制