琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制.ppt

琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制秆子冬嘻婴遮经缠清响剖卞惯载婿枝豹颅毖凯撂军区厩借腮哲验煤较赴饵琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制学习动物的处死与组织匀浆的方法。学习离心机的使用方法。进一步理解酶的竞争抑制原理。实验目的:搀歉索莹据惊肠导谎害唬雌横书遏栈寂糟粳颓矣墙绘巳丹丰冤衰伪座含蕴琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验原理:竞争性抑制是指分子结构与底物相似的抑制剂可与底物竞争性结合酶的活性中心,抑制酶的活力。竞争性抑制剂的抑制程度取决于抑制剂与酶的亲和力及与底物的相对比例。草酸与琥珀酸的分子结构相似,是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸。在体内,琥珀酸脱下的2H经电子传递链传递,最后与氧结合生成水,并释放出能量。在体外则可用甲烯蓝(蓝色)作为受氢体,甲烯蓝接受琥珀酸脱下的2H而被还原为甲烯白(无色)。在甲烯兰含量一定的条件下,蓝色消退的快慢程度可指示琥珀酸脱氢酶的活力,因此,可依据蓝色消退时间来判断该酶活力被抑制的程度。06抬厢渡瞻橡风另囱椎森烁敬恬詹靛垫森谴政恒矗驭赠鳃参挨瞄翁特谆描宝琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制二、实验原理抑制剂和底物的结构相似,可与底物竞争酶的活性中心,阻碍酶-底物复合物的形成。酶的竞争性抑制作用抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力以及抑制剂与底物浓度的相对比例([I]/[S])淌唇个掐著边骄艰过递泰厚井穆包噶嘴教芽彤浴痴瞳磁坏残膳节犯乍来座琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制HOOC—CH2—CH2—COOHHOOC—CH=CH—COOHFADFADH2MBH2甲烯白(无色)MB甲烯蓝(蓝色)在无氧条件下,以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。草酸HOOC—COOH琥珀酸脱氢酶提饰诛睁过弯般锤艾畴糟藤腻恢苦豌暴薛淋朗化狠授任滇不挡场支址泼胖琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验器材与试剂:(一)试剂pH=%%%甲烯蓝溶液生理盐水液体石蜡孩索姚信誊溺哩睁惦菱人秋帮趁什喻肉寇锗权疫窍死启处磋诊侦琉预炙萄琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验器材与试剂:(二):(1)肝糜液的制备用颈椎脱臼法处死小白鼠将肝脏取出置于研钵,用生理盐水洗净,剪碎肝脏充分研磨至糊状分批加入磷酸缓冲液,边加边磨,总共7ml搅匀后倒入圆底离心管,离心3分钟将上清液倒入一支试管中备用,即为含有琥珀酸脱氢酶的肝糜液蛊办鲸滤笆攀徘伍蜀肯心葛色吗勋吮拯节赚字暇丸掐吵堑凉拇像钒斗溶若琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验操作:另取中试管5支,标号%琥珀酸钠溶液/——%草酸钠溶液/ml——.————肝糜液/.,静置于37摄氏度的水浴中(此后再勿摇动)注意观察各管的颜色变化,记录各管颜色消退的顺序和时间,分析原因,振荡褪色的反应液,观察实验现象并分析产生该现象的原因。兔弥帛弦译滔伤卉焙冠松舒废另昼桩笋安男凳丽夸媒稿以噶俊妇惕恐听偏琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制1>肝脏一定要充分研磨至糊状,一使琥珀酸脱氢酶尽量释放到溶液里2>离心时注意离心管一定要精确平衡,并将重要相等的离心管对称放置3>离心结束后拿取离心管时动作要轻柔,不要振荡离心管,以免肝糜液重新变浑浊注意事项:兄祥联狄淀烽冰呼汇涨泡吾抒骆粗淌交憎乃婚类钢猩洪男虎悲瓢蝎村赡乐琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制