凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.docx

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒.docx:..凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,)使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUXEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程屮细胞核DNA的断裂情况,其原理是牛物素(biotin)标记的dUTP在脱氣核糖核甘酸末端转移酶(TdTEnzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3-011末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-0H形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。本试剂盒特点•操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有ProteinaseK和DAB。•高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。•高特异性:能特异性染色凋亡细胞。•快速操作:整休操作约需3小时。•用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。•方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。•高正确性:冇阳性对照片的制备方法,,提前准备好相关试剂。,使用前请离心集液。、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。,再分别滴加于各样木片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。-20°C的70%乙醇屮放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。,不耍直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。,以5分钟清洗3次为标准。,使用前加入PBS配制成20XDAB(10mg/ml)后,按说明书显色使用。二、TUNEL试剂盒组分组份Cat:KGA702Cat:KGA703Cat:-20°CBiotin-ll-dUTP20uL50uL100uL-20°CTdTEnzymo80uL200nL400uL-20°C50XProteinaseK40uL100uL200uL-20°CStreptcividin-I1RPIOpL25uL50uL4°C避光DAB2mg5mg10mg-20°C试剂盒以外自备仪器和试剂光学显微镜、37°C孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-、复染染液:苏木素或甲基绿等。三、操作流程概览四、检测样本的预处理TUNEL检测时样木的预处理是试验的关键所在,木说明书推荐的条件仅为普遍情况,用户需根据口已的样木材料及首次试验结果來调整各个条件(参照Page9},如