志贺菌属细菌耐药相关质粒的耐药性研究.pdf

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学位论文作者:伽确学位论文作者:确原学位论文使用授权声明日期:≯年乡月/日日期:如勰月莎日本人郑重声明:所呈交的学位究所取得的成果。除文中已经注明或集体已经发表或撰写过的科研成体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑笱А1C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑ā
摘要方法志贺菌魑J芴寰粤俅卜掷氲哪投嘁┐蟪Ω艘馝9┨寰ü雍转移实验构建了多重耐药转移菌株,并通过抑制性消减杂交实验筛选出一部细菌耐药,是指细菌能在杀死它们或削弱它们的药物中获得生存的本能。细菌耐药性的来源有两个途径,即自身基因突变和耐药基因的获得。外源性耐药基因的获取,是细菌耐药性广泛散播的主要原因,一般通过可移动遗传元件质粒是一种独立的、可自我复制的遗传元件,自身可携带耐药基因,亦可作为其他可移动遗传元件的载体,介导菌株间基因水平转移,在耐药基因的扩散过程中扮演着关键角色。因此研究质粒慕峁梗治鲋柿K墓δ基因及质粒与细菌耐药性的关系,对细菌耐药分子机制的深入研究具有重要意为了系统研究基因的水平转移,本课题组已选用对抗生素敏感的一株福氏分序列,斑点杂交试验结果表明这些序列在供体菌及转移菌株的质粒上均存在,克隆转化实验发现这些序列与细菌耐药有关手蟪普庑┬蛄形D鸵┫喙匦列5呛姓庑┠鸵┫喙匦蛄械闹柿J欠裎D鸵┲柿#欠裎=雍现柿#导供体菌和受体菌之间耐药性的传递,仍需进一步验证。故本课题将通过转化实验获得含有该质粒的转化子,分析该质粒与耐药性的关系,对该质粒上的耐药基因进行筛选,检测该质粒上所存在的与耐药相关的可移动遗传元件,以探索该质粒在耐药过程中所起的作用及其耐药机制,为更全面的了解质粒所介导阳性克隆的获得ü慕肿涌寺∩厦娴闹柿W;笛榉椒ǎ档驮づ养转速、预培养温度及延长预培养时间,将实验室储存的志贺菌属细菌质粒弥柿@丛从谕ü雍献R剖笛榛竦玫哪投嘁┑闹竞鼐糇R浦闦体菌为临床分离的耐多药的大肠杆菌,受体菌为敏感的福氏志贺菌完成,如质粒、转座子、整合子、插入序列共同区等。义。的耐药分子机制提供基础资料。中文摘要
漳课题组前期研究筛选的位于质粒上的耐药相关序列之一陨秆⊙粜钥寺林避辛搅、氯霉素⑺幕匪、链霉素幺七里质粒鉴定:通过对抗生素培养板上的单克隆进行菌落鸵┫、磺胺甲嗯唑⑴捣承、庆大霉素,浓度分别为最小抑菌浓度/钚∫志ǘ,过夜培养后,挑取板上的单克隆,进行菌落┰瞿鸵┫喙匦虼鮅本质粒提取:将阳性克隆挑至含腖禾迮嘌校古嘌ü心收集菌体,进而使用生物公司的质粒小量提取试剂盒提取质粒,然后在%的琼脂糖凝胶上与原质粒进行电泳比对。药物敏感试验:┥⒎ń幸┟艏ǎ生素药敏纸片包括:头孢噻吩、头孢唑啉⑼锋哌恍聊、头孢他啶⑼锋咚ぃ死⑼锋哌岭、头孢噻肟⑼锋哙珉浚死⑼锋哌螂、头孢哌酮曲南⒒前芳锥襁、甲氧苄啶⑴捣承、阿莫西庆大霉素、亚胺培南取K弥士鼐晡4蟪Ω司鶤。耐药基因筛选:根据药敏结果参考相关文献设计引物筛选质粒上可能存在的耐药相关基因:喹诺酮类耐药相关基因、、、、、基因,并将获得的锼椭辽锕静庑蚣ǎ瑽比对后对基因进行确认。耐药相关的可移动遗传元件的筛选:参考相关文献设计引物筛选质粒上可能存在的可移动遗传元件相关基因,包括插入序歹、整合酶基因及航雍现柿R糯ū昙莟相关基进行确认。、甤锋呔乩嗄鸵┫喙鼗騜,磺胺耐药基因及氯霉素乙酰转移酶基因鹊囊铮琍相关因,并将获得的锼椭辽锕静庑蚣ǎ瑽比对后对基因中文摘要
结论关键词:志贺菌属细菌质粒转化耐多药,在含的固体培养基上获得阳性克隆;质粒凝胶电泳比对结果显示转化子质粒即为所转化的志贺菌属细菌质粒。┟艏ǎ焊惺芴蟪Ω司运械目股孛舾校;佣訡、鸵对中介耐药,对其他抗生素则敏感。转化子与感受态大肠杆菌抑菌环直径的变化在凇确证实验表明该转化子为非产耐药基因的筛选:该质粒上存在耐药基因、及醇觳獾洁诺酮类抗生素耐药相关基因。耐药相关可移动遗传元件的筛选:嗾献用富蚣觳庋粜裕唤雍现柿R传标记筛选阳性;未检测到插入序列、、的存该质粒为广宿主接合质粒,可介导大肠杆菌与志贺菌属细菌问耐药性的传弥柿N6嘀啬鸵┲柿#山榈枷妇酝锋呃嗫股丶暗セ纺邗@嗫股啬药;与喹诺酮类抗生素、氯霉素、磺胺类等抗生素耐药性的产生有关。该质粒上所含有的耐药基因及耐药