磁性杂体交联酶聚集体的制备及其酶学特性分析.pdf

ClassifiedIndex:Q墨!堡:兰UDC:579SecrecyRate:PubiziedUniversityCode:ross--linkedEnzymeAggregatesCandidate:Supervisor:AssociateSupervisor:AcademicDegreeApppliedfor:Speciality:Employer:DateofOralExaminatiOH:,2014河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:剃菪壶伽f午年岁野哆B指删雠:耿吒易Ⅳ年歹月蠕河北科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。口保密,在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于\缶保密。(请在以上方框内打V)学位论文作者签名:煌乏乏指导教师签名:秘学五垆期谬亿N年歹月“摘要摘要磁性纳米材料是近年来备受关注的一种绿色材料,其超大的比表面积,磁效应等特性使得磁性纳米材料作为酶固定化的载体具有很多优势。许多学者对表面进行活性基团修饰的磁性载体固定化酶进行了研究,但是对表面无活性基团修饰的磁性载体固定化酶的研究报道却很少。因此,本研究使用表面无活性基团修饰的Fe304磁性纳米颗粒作为载体,结合交联酶聚体技术对酶固定化做了研究,成功制备出磁性杂体交联酶聚体()。通过以粘红酵母苯丙氨酸解氨酶(PAL)和假丝酵母属脂肪酶(CSL)为模型酶,分别制备出了磁性杂体苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体(HM—)及磁性杂体脂肪酶交联酶聚体(),优化了HM—PAL—CLEAs及HM—CSL-CLEAs的制备条件,并对其酶学特性进行了研究。1)Fe304磁性纳米颗粒的制备及表征使用共沉淀法制备了Fe304磁性纳米颗粒,并使用冷场扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)、红外光谱仪(FTIR)、震动样品磁强计(VSM)对Fe304纳米颗粒进行了表征。结果表明,磁性纳米颗粒形态为比较规则的球形,颗粒大小均一,粒径大致为30吼,且分散比较均匀;,具有较高的饱和磁化强度;XRD及FTIR图表明磁性纳米颗粒为Fe304晶体。2)HM—PAL——CLEAs的最优制备条件,。结果表明,:,,(NI-h)2S04饱和度55%,%。在优化条件下制各的阳Ⅵ.%。与游离酶相比,HM—PAL—CLEAs的pH稳定性、变性剂稳定性、储存稳定性和重复使用性显著提高。3)HM—CSL—CLEAs的制备及酶学特性的研究使用中心复合响应面和单因素实验优化了HM—,并对HM—。HM—CSL—CLEAs的最优制备条件为:磁性纳米颗粒浓度35mg/ml,,(NH4),%。在优化条件下制备的HM—CSL-CLEAs的酶活回收率为40%,蛋白回收率为62%。与游离酶相比,HM—CSL—CLEAs的最适pH及温度发生了改变,热稳定性及储存稳定性明显提高。关键词磁性纳米颗粒;交联酶聚体;磁性杂体交联酶聚体;苯丙氨酸解氨酶;河北科技大学硕士学位论文脂肪酶;固定化;