血红蛋白的提取和分离预习学案.doc

【导学诱思】思考1:分离生物大分子的基本思路是什么?思考2:蛋白质的分离和提取的原理是什么?思考3:高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用,作用结果是什么被破坏?思考4:人们用鸡的红细胞提取DNA,用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?一、基础知识:㈠凝胶色谱法(分配色谱法):1、概念:根据被分离蛋白质的,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来分离蛋白质的有效方法。2、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程,移动速度,而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在移动,路程,移动速度,相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程:凝胶颗粒相对分子质量较小的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质(1)(2)(3)(4)(5);的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面,在了里之间迅速通过。B.(1)混合物上柱;(2)洗脱开始,的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内;的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外;(3)的蛋白质被滞留;的蛋白质被向下移动。(4)不同的蛋白质分子完全分开;(5)的蛋白质行程较短,已从中洗脱出来,的蛋白质还在行进中。㈡缓冲溶液:1、概念:在一定的范围内,能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用:能够抵制的对溶液的的影响,维持PH基本不变。3、缓冲溶液的配制通常由种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的就可以制得使用的缓冲液。思考:说出人体血液中缓冲对?思考:在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么?它的目的是什么?㈢电泳:1、概念:指发生迁移的过程。2、原理:许多重要的生物大分子,如等都具有在下,这些基团会带上。在电场的作用下,这些带电分子会向着与其移动。电泳利用了待分离样品中各种分子以及分子本身、的不同使带电分子产生不同的,从而实现样品中各种分子的分离。阴极阳极加入待分离的样品带电性质、分子大小和形状的不同,使分子迁移速度不同分子向阳极移动缓冲液琼脂胶溶液槽凝胶电泳原理示意图3、分类:①电泳②电泳。测定(蛋白质相对分子质量)通常用十二烷基硫酸钠(SDS)—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链,因此测定的结果只是。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物,SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别,使电泳迁移率完全取决于。二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理——粗分离——纯化——(1)红细胞的洗涤①目的:去除②方法:离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果),然后用胶头吸管吸出上层透明的,%的氯化钠溶液洗涤⑤低速离心(低速短时间)⑥重复4、5步骤次,直至上清液中已没有,表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化,不可洗涤次数过少。(2)血红蛋白的释放加到体积,再加40%体积的溶解细胞膜),置于上充分搅拌10分钟(加速细胞破