淀粉酶活性测定要点.pptx

《植物生理生化实验Ⅰ》( 45 学时) 2011 -2012学年第一学期:《植物生理生化实验Ⅰ》21学时第二学期:《植物生理生化实验Ⅱ》24学时《植物生理生化实验》《植物生理生化实验Ⅰ》实验五淀粉酶活性的测定福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》淀粉酶普遍存在于植物体内,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强; 淀粉酶活性高低可以衡量种子萌发速率; 淀粉酶活性高低作为水稻抗逆性的生化指标(如干旱、盐、重金属胁迫); 。。。。。一、测定意义: 福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》 1、了解α-淀粉酶、β-淀粉酶的不同点及其淀粉酶活性测定的意义; 2、掌握恒温水浴的控温方法; 3、学会用比色法测定淀粉酶活性的原理及其操作要点; 4、比较不同发芽水稻种子和吸胀水稻种子淀粉酶活性的差异。二、目的要求: 福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》根据α-和β-淀粉酶的理化性质α-淀粉酶不耐酸,在 pH3. 6以下迅速钝化; β-淀粉酶不耐热,在 70 ℃ 15mi n则被钝化。 1、淀粉酶提取α-淀粉酶提取液 70℃15分钟钝化β-淀粉酶β-淀粉酶提取液 pH 以下 0℃钝化α-淀粉酶三、原理: 《植物生理生化实验Ⅰ》淀粉酶活性与产生的还原糖量成正比棕红色产物λ max=5 40nm 2、(C 6H 10O 5)n+ 12H 22O 113-氨基-5-硝基水杨酸淀粉酶 40℃ 3、C 12H 22O 1 1 +3,5-二硝基水杨酸福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》四、植物材料: 2、发芽水稻种子:水稻种子用水浸种两天后于35 ℃催芽两天。水稻种子 1、吸胀水稻种子:水稻种子用水浸种两天。(对照) 实验项目水稻种子重量( g) 吸胀水稻种子发芽水稻种子实验一可溶性蛋白质 实验二游离氨基酸 11 实验三淀粉酶活性 11 实验四 POD 同工酶 11 福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》电子天平; 722 S分光光度计; 研钵;移液管; 100m l容量瓶; 20m l具塞刻度试管;普通试管; 三角瓶; 漏斗等。五、仪器设备福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》六、试剂配制: (1mg?ml -1):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至 100 ml。 ,5-二硝基水杨酸试剂: 精确称取1g3,5-二硝基水杨酸, 溶于20ml2mol?L -1NaOH溶液中,加入50ml蒸馏水, 再加入 30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml。盖紧瓶塞, 勿使CO 2进入。若溶液混浊可过滤后使用。 ?L -: A液( ?L -1柠檬酸):称取 C 6H 8O 7?H 2O ,用蒸馏水溶解并定容至1L; B液( ?L -1柠檬酸钠): 称取Na 3C 6H 5O 7?2H 1g,用蒸馏水溶解并定容至1L。取A液 55ml与B液145m l混匀,?L -1pH5. 6的柠檬酸缓冲液。 %淀粉溶液: 称取 ?L -。福建农林大学生命科学学院-植物生理生化实验室《植物生理生化实验Ⅰ》七、操作步骤: : 1) 淀粉酶原液提取: 称取1g萌发种子→置于研钵中研磨匀浆石英砂 2m l蒸馏水→用少量多次蒸馏水洗入 100ml 容量瓶,并用蒸馏水定容至刻度→混匀室温放置 10min (常摇动使其充分提取) →混匀用干燥滤纸过滤至三角瓶中,滤液即为淀粉酶原液。 2) 淀粉酶稀释液: 吸取上述淀粉酶原液 1ml ,加 4ml 蒸馏水,摇匀。