植物病原线虫的分离方法及形态观察实验.docx

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植物病原线虫的分离
一、目的要求
了解从土壤和植物组织中分离线虫的基本原理， 掌握从土壤和植物组织中分离线虫的常用方
法。学习在解剖镜或扩大镜下用镊子、竹针、 毛针或植物材料，在室温（ 20~ 25 ℃ ）下保持
3d，去掉筛网后，将下面浅盘中的水样过筛（上层为 25 目，下层为 400 目），将下层筛上
的线虫用小水流冲洗到记数皿中，观察记数。
5．漂浮器分离法
对于没有活动能力的孢囊线虫的孢囊可采用漂浮器分离法 （Fenwick-Oostenbrink 改良漂浮
法），该法需要特制的分离装置。分离时先将漂浮筒内盛满清水， 将 100g 风干的土样放在
上筛中，用强水流冲洗土样，使其全部洗到漂浮筒内，并从环颈水槽流到承接的细筛（ 100
目）中，再用细水流冲洗一会， 使漂浮物全部流入细筛。 将细筛中的孢囊等漂浮物用水洗入
烧杯 或三角瓶中，再倒入铺有滤纸的 漏斗中，用毛笔收集并观察滤纸上的孢囊。
提示 漂浮分离的土样必须要风干，否则孢囊不能在水中漂浮，需用比重小于 1 的溶剂。
五、所需时间流程
1． 漏斗 分离 样品浸泡 放出水浸液、离心 镜检
2．培育分离 样品培育 过筛、收集、镜检
3．浅盘分离 样品浸泡 样过筛、收入记数皿、镜检
4．漂浮分离 10 min 左右。
六、实验作业
比较各种线虫分离方法的优缺点。
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一、目的和要求
识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫 .
二、材料和用具
草莓芽干尖线虫 （ Aphelenchoides besseyi ）或珠蓝线虫； 小麦粒线虫 （ Anguina tritici ），
破坏性茎线虫（ Ditylenchus destructor ），寄主甘薯，南方根结线虫（ Meleidogyne
arenaria ），寄主花生等；大豆胞囊线虫（ Heterodera glycines ）；长针线虫 (Longidorus
sp. ）；毛刺线虫（ Trichodorus sp. ）。
寄生性线虫病的危害状标本或幻灯片。
线虫的固定液有多种，常用的有 FA、 FAA和 TAF 等三种：
1） FA 液：福尔马林（ 36％甲醛） 10ml，蒸馏水 90ml；
2） FAA液：福尔马林 10ml，冰醋酸 1ml ，蒸馏水 89ml，
3） TAF液：三羟基乙胺 2mi，福尔马林 7m1，蒸馏水 91ml。
三、内容与方法
线虫形态的观察
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1） 粒线虫属（ Anguina ）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形虫瘿的外形与麦粒有什么区别
取虫瘿一个， 用刀片切开或挑针挑破， 挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。
2） 茎线虫属（ Ditylenchus ）
观察甘薯茎线虫（ D． destructor ）危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距
虫体末端有一定间隔。 因虫体很小， 观察内部器官需用高倍镜。 观察示范镜下的雄虫尾部形态。
3）滑刃线虫属 （ Aphelenchoides ）有各种危害状， 例如水稻 (Rice) 干尖线虫（A．besseyi ）
引起水稻 (Rice) 干尖线虫病，以剑叶的干尖最明显，剑叶尖端 2－ 6 厘米一段变为白色。干