植物病原线虫的分离方法及形态观察实验.docx

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植物病原线虫的分离方法及形态观察实验
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植物病原线虫的分离
一、目的要求
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该方法原理与漏斗分离法一样， 但分离效果更好， 而且泥沙等杂物较少。 用两个不锈钢浅盘
套放在一起，上面一个是筛盘， 它的底部是筛网， 网目大小为 10 目 / 英寸， 下面一个是稍大
的盛水盘。 也可在培养皿上放置一个稍小的做成浅盘状的金属网， 网与培养皿底部保持一定
距离。
分离时将线虫滤纸放在网上用水淋湿， 上面再放一层餐巾纸， 将要分离的土样或植物材料放
在餐巾纸上，在两盘之间缝隙中加水，淹没土样或植物材料，在室温（ 20~ 25 ℃ ）下保持
3d，去掉筛网后，将下面浅盘中的水样过筛（上层为 25 目，下层为 400 目），将下层筛上
的线虫用小水流冲洗到记数皿中，观察记数。
5．漂浮器分离法
对于没有活动能力的孢囊线虫的孢囊可采用漂浮器分离法 （Fenwick-Oostenbrink 改良漂浮
法），该法需要特制的分离装置。分离时先将漂浮筒内盛满清水， 将 100g 风干的土样放在
上筛中，用强水流冲洗土样，使其全部洗到漂浮筒内，并从环颈水槽流到承接的细筛（ 100
目）中，再用细水流冲洗一会， 使漂浮物全部流入细筛。 将细筛中的孢囊等漂浮物用水洗入
烧杯 或三角瓶中，再倒入铺有滤纸的 漏斗中，用毛笔收集并观察滤纸上的孢囊。
提示 漂浮分离的土样必须要风干，否则孢囊不能在水中漂浮，需用比重小于 1 的溶剂。
五、所需时间流程
1． 漏斗 分离 样品浸泡 放出水浸液、离心 镜检
2．培育分离 样品培育 过筛、收集、镜检
3．浅盘分离 样品浸泡 样过筛、收入记数皿、镜检
4．漂浮分离 10 min 左右。
六、实验作业
比较各种线虫分离方法的优缺点。
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一、目的和要求
识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫 .
二、材料和用具
草莓芽干尖线虫 （ Aphelenchoides besseyi ）或珠蓝线虫； 小麦粒线虫 （ Anguina tritici ），
破坏性茎线虫（ Ditylenchus destructor ），寄主甘薯，南方根结线虫（ Meleidogyne
arenaria ），寄主花生等；大豆胞囊线虫（ Heterodera glycines ）；长针线虫 (Longidorus
sp. ）；毛刺线虫（ Trichodorus sp. ）。
寄生性线虫病的危害状标本或幻灯片。
线虫的固定液有多种，常用的有 FA、 FAA和 TAF 等三种：
1） FA 液：福尔马林（ 36％甲醛） 10ml，蒸馏水 90ml；
2） FAA液：福尔马林 10ml，冰醋酸 1ml ，蒸馏水 89ml，
3） TAF液：三羟基乙胺 2mi，福尔马林 7m1，蒸馏水 91ml。
三、内容与方法
线虫形态的观察
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1） 粒线虫属（ Anguina ）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的