高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸含量.doc

高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸含量
何玉川 郭琳 徐艳红 [摘要] 目的 应用反相高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸的含量。 方法 以乙睛-%磷酸溶液(13∶87)为流动相, mL/min,检测波长为3pears to be simple, reliable, accurate and can be used to the quality control of the preparation.
[Key words] RP-HPLC; Mailuoning granules; Chlorogenic acid; Determination

脉络宁颗粒由金银花、牛膝 、玄参、石斛、等中药材经提取精制而成[1],具有清热养阴,活血化瘀的功能,用于血栓闭塞性脉管炎,静脉血栓形成,动脉硬化性闭塞症,脑血栓形成及后遗症等。金银花主要活性成分为绿原酸,绿原酸含量测定方法成熟、简便准确,故采用《中国药典》2010版(一部)中金银花含量测定项下的方法和液相色谱条件[2]以及相关的文献[3-8]报道进行含量测定方法的研究,现报道如下:
1 仪器与试药
P200II高压恒流泵、UV200Ⅱ紫外可变波长检测器(大连依利特分析仪器有限公司),千谱色谱工作站;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110753-200413);样品:脉络宁颗粒(江西银涛药业有限公司;批号:1110011、1111012、1111013);乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:迪马C18柱(250 mm× mm,5 μm);柱温:25℃;流动相:乙睛-%磷酸溶液(13∶87);流速: mL/min;检测波长:327 nm;进样量:10 μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3 000,。
溶液的制备
g,精密称定,置具塞瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,塞紧后称定重量,超声5 min使其溶解,放置至室温,再称定重量,滴加50%甲醇补充至相同重量,滤过, μm滤膜,作为供试品溶液。取绿原酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并制备成每1毫升含40 μg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。取不含有金银花的阴性样品,依上述供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。
方法学考察
阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL分别注入液相色谱仪,供试品溶液色谱中,在与对照品溶液色谱相应的位置上有相应的色谱峰,而阴性对照品溶液色谱中在此位置并无相应的色谱峰,证明本方法可行。色谱图见图1。
线性关系考察: mg至25 mL容量瓶中加50%甲醇溶解并至刻度,摇匀, 9 mg/mL的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液1、2、4、6、8 mL至10 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得不同浓度的线性关系对照品溶液,分别吸取上述各对照品溶液10 μL注入色谱仪中,测定峰面积,以绿原酸的量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线图,并计算回归方程。回归方程为