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外泌体提取的具体步骤及方法
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡（30-150nm），现今， 其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微 粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质 中外泌体提取的具体步骤及方法
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡（30-150nm），现今， 其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微 粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质 中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有：肥大细胞、淋巴细胞、树突状细 胞、肿瘤细胞、间充质干细胞等。
外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理 病理上起着重要的作用。同时，不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功 能，可作为疾病诊断的生物标志物。
1983 年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987 年 Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可 分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多 囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。
所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中， 包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组 成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前 被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增 长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能 性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁 移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切 相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方
面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未 来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌 体对后续的研究至关重要。据了解，目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、 超滤、沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离：
超速离心法（差速离心）
超离法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进 行（如图所示），可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获 得的囊泡数量较多而广受?欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可
能与转子类型有关），纯度也受到质疑 囊泡造成损害，从而降低其质量。
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2. 密度梯度离心
在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，
是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在 -
。此法获得的外泌体