脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的实验研究.pdf

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脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的实验研究一加琁·论著·;,猇.,.张畔郭聪芳骆宁王兵徐新女脓毒症被认为是由感染引起的全身炎症反应综合征,可进一步发展为严重脓毒症、感染性休克及多器官功能障碍综合征。在探索脓毒症发病机制过程中,人们逐渐认识到机体并非一直处于促炎状态,免疫功能紊乱与大量淋巴细胞凋亡及免疫受抑状态密切相关。对死于脓毒症患者的尸检结果显示,该类患者有广泛的免疫细胞消失,如馨拖赴淋巴细胞,其分别减少抗体生成、巨噬细胞激活和抗原呈递F⒃嘧魑;遄大的外周免疫器官,是淋巴细胞的主要居住场所,其在脓毒症患者细胞和体液免疫应答中起关键性作用。本研究中拟观察脓毒症大鼠脾脏、馨拖赴虰淋巴细胞随时间推移的数目变化、凋亡发生情况及其分子机制。牧嫌敕椒动物分组及模型制备:健康雄性大鼠【摘要】观察脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞的数量变化及细胞凋亡情况,探讨脓毒症时免疫失衡的机制。方法健康雄性大鼠只,按随机数字表法分为假手术组、模型组。采用盲肠结扎穿孔术票概Ф局⒋笫竽P停谥颇:、、、、钌倍锶∑⒃啵兴漳舅匾灰梁染色,光镜下观察脾脏组织病理变化;采用免疫组化法检测脾脏、馨拖赴虰淋巴细胞以及一鞍妆泶铮徊捎迷荒┒巳笨瘫昙欠检测脾脏细胞凋亡指数。结果光镜下观察模型大鼠脾脏白髓逐渐萎缩,淋巴小结结构破坏。制模P妥榇笫笃⒃郈淋巴细胞数、巴细胞数、。相关分析表明:,。结论脓毒症早期免疫功能处于紊乱状态,表现为脾脏馨拖赴淋巴细胞数减少,细胞凋亡显著增加,一谂Ф局⑵⑾赴蛲鲋蟹⒒恿斯丶饔谩【关键词】脓毒症淋巴细胞;凋亡,...,.·中国危重病急救医学年月第卷第期目的,驛。荆琗一行西./,基金项目旖蚴幸揭┪郎幸健⒅形饕浇岷峡蒲锌翁作者单位天津市第一中心医院急救医学研究所篫甤珿,..:..,猚簉甊,
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一唬逯喊滋旖蚴蟹派湟窖а芯所实验动物中心细裰ず牛簊津—将大鼠编号后按照随机数字表法分为假手术组和模型组,两组再按动物处死时间分为鲅亲椋偈质踝槊孔只,模型组每组只。按照萵ǖ赖姆椒行盲肠结扎穿孔术粗蒲现馗骨桓腥局屡Ф症动物模型,术毕皮下注射/生理盐水抗休克。假手术组动物只行开腹、关腹手术。检测指标及方法:分别在相应时间点处死动物,取脾脏,制备石蜡切片和冰冻切片待测。.⒃嘧橹±砉鄄欤浩⒃嘧橹荻扰ǘ纫醇脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋,连续切片,厚度痶漳舅匾灰梁旧ǎ饩迪鹿鄄臁.⒃郥淋巴细胞检测:制备大鼠脾脏冰冻切片,采用免疫组化法检测各组大鼠脾脏、馨拖赴粜韵赴こ首鼗粕派ā.⒃郆淋巴细胞检测:制备大鼠脾脏石蜡切片,采用免疫组化法检测各组大鼠脾脏阳性淋巴细胞,阳性细胞膜呈棕黄色着色。.⒃嘞赴蛲黾觳猓褐票复笫笃⒃嗍片,应用原位末端缺刻标记法蛲黾觳试剂盒检测凋亡细胞,阳性细胞核呈棕褐色。.⒃郆、蛋白表达:制备大鼠脾脏石蜡切片,采用免疫组化法检测駼一粜韵胞,阳性细胞质呈棕黄色着色。图像分析及处理:应用像分析系统进行图像采集及分析。光镜下低倍视野观察反应情况,每组选徘衅空徘衅机选龈弑妒右×舛ɑ治舛值,以凋亡细胞数占细胞总数的百分比作为凋亡指数。统计学处理:,计量资料以均数士