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过氧化氢酶测试
什么是过氧化氢酶？
过氧化氢酶是生活在充满氧气的环境中的微生物产生的一种酶，可以保护自己免受过氧化氢（H2O2）的氧化损伤。
过氧化氢是利用氧气的微生物中细胞呼吸的副产物。过氧化氢酶将过氧化氢水解成无毒的水和氧气。
图1：过氧化氢酶催化的反应。
过氧化氢酶阳性的微生物包括专性需氧菌和兼性厌氧菌。他们具有使用氧作为最终电子受体的能力。
仅发酵且不使用氧气作为最终电子受体的专性厌氧菌或兼性厌氧菌是过氧化氢酶阴性的。
过氧化氢酶测试的目的
进行过氧化氢酶测试以确定微生物中过氧化氢酶的存在。该测试可以帮助识别和区分不同的微生物。
更具体地说，该测试用于：
从链球菌和肠球菌（过氧化氢酶阴性）中区分出形态相似的革兰氏阳性球菌-葡萄球菌（过氧化氢酶阳性）
区分革兰氏阳性孢子形成杆菌–芽孢杆菌属物种（过氧化氢酶阳性）的耐气梭菌（过氧化氢酶阴性）。
区分需氧菌（过氧化氢酶阳性）和专性厌氧菌（过氧化氢酶阴性）
鉴定和区分肠杆菌科细菌
使用半定量过氧化氢酶测试鉴定结核分枝杆菌
确定细菌的毒力
过氧化氢酶测试原理
过氧化氢酶将过氧化氢水解成水和氧气，这可以通过立即形成气泡（起泡）来证明。
当接种物与过氧化氢接触时发生氧气鼓泡时，微生物菌落中就会出现过氧化氢酶。当暴露于过氧化氢时没有气泡产生或气泡产生较弱时，则明显没有过氧化氢酶。（4）
过氧化氢酶测试程序
过氧化氢酶测试有多种变体。这里讨论的方法是滑动方法，管方法和管（倾斜）方法。其他方法，例如用于鉴定结核分枝杆菌的半定量过氧化氢酶测试，用于区分分枝杆菌种类的热稳定过氧化氢酶测试，毛细管法和盖玻片法，在此不作详细介绍。（5）
滑动法/下降法
使用无菌接种环或无菌木棍，取出少量18至24小时的微生物菌落，并将其放在干净，干燥的玻璃载玻片上。
避免捡起任何琼脂，尤其是使用含有红细胞的琼脂时。红细胞含有过氧化氢酶，会产生假阳性结果。
使用滴管，向显微镜载玻片上的细菌菌落中加入一滴3％的过氧化氢。
立即观察气泡的形成。将幻灯片放在深色背景上便于观察。
管法
向试管中加入4至5滴3％的过氧化氢。
使用木制涂药棒，取少量18至24小时的微生物菌落，并将其放入试管中。
避免捡起任何琼脂，尤其是使用含有红细胞的琼脂时。
立即观察木制涂药棒末端是否有气泡形成。将试管放在深色背景上便于观察。
管（倾斜）法
向在营养琼脂斜面上生长的18至24小时的微生物培养物中添加1 mL的3％过氧化氢。
立即观察气泡的形成。将试管放在深色背景上便于观察。
过氧化氢浓度
对于需氧量的常规测试，使用3％的过氧化氢。
为了测试厌氧菌，使用了15％的过氧化氢。在这种情况下，过氧化氢酶测试用于区分梭菌和芽孢杆菌。
为了使用Superoxol测试（类似于过氧化氢酶测试的测试）识别不同的奈瑟氏球菌，使用30％过氧化氢。
过氧化氢酶测试的质量控制
阳性对照： 金黄色葡萄球菌
阴性对照： 粪肠球菌
过氧化氢酶测试结果
积极成果：立即大量泡沫形成
例子：
使用3％过氧化氢的常规测试：葡萄球菌，微球菌，李斯特菌，白喉棒状杆菌，洋葱伯克霍尔德菌，诺卡氏菌，肠杆菌科成员（柠檬酸杆菌，大肠杆菌，肠杆菌，克雷伯菌，志贺氏菌，耶尔森氏菌，变形杆菌，沙门氏菌，沙雷氏菌结核分枝