2周和26周GK基因敲除小鼠肝脏基因表达差异研究.pdf

内蒙古医学院
硕士学位论文
2周和26周GK基因敲除小鼠肝脏基因表达差异的研究
姓名:高辉
申请学位级别:硕士
专业:药理学
指导教师:刘晓雷
20070501
涣—舢叫一凸‰。胸岽蚩蹩跻灰幌簀蒜;吲;Q颠蟆璦考降饲畲秦碧年发病的成年型糖葡萄糖一慌襥乏酾中英文缩略语表。哆一—“衝英文名称中文名称明广英文缩写氨苄青霉素碱基对双蒸水焦碳酸二乙酯二硫苏糖醇溴化乙锭乙二胺四乙酸胰岛素受体磷酸甘油醛脱氢酶⊙遖豫辩葡萄糖激酶宦疬撬抟籭—非胰岛紊依赖性糖尿聚合式酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠抑制性消减杂交四甲基乙二胺%猽一Ⅷ∞一Ⅶ:陀一籶縜∞
论文作者签名鳟、口暌匀指导教师签名盔槔荻内蒙古医学院学位论文原创性声明秒窍;日妒年《黾学位论文版权使用授权书郑重声明:本人所呈交的学位论文是在导师指导下,独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外,本论文内容不包含其他个人或集体已经公开发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人学位论文与资料若有不实,愿意承担一切相关的法律责任。论文作者签名本人完全了解学院有关保留、使用学位论文的规定,同意学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。学院享有发表、复制、查阅、借阅及申请专利等权利。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时本人保证:毕业后发表、使用学位论文以及结合学位论文研究课题再撰写的文章,作者署名单位一律为内蒙古医学院。
中文摘要旨在通过进一步研究肝脏特异性基因敲除小鼠模型,考察不同年龄基因敲除小鼠肝脏基因表达的差异。方法本课题组自行构建肝脏特异性基因敲除小鼠模型,测定堋周、芎苣P褪蟮目崭寡L侵怠⑵咸烟悄土俊⒀G逡鹊素、葡萄糖激酶活性、葡萄糖激酶和胰岛素受体的蛋白表达,选取芎芰阶檠L值明显差异的模型动物,通过抑制性消减杂交的方法分析模型鼠肝脏基因表达的差异。结果实验结果表明苣P褪蟮目崭血糖值与其他各组有显著性差,空腹血糖值随年龄增加而升高,糖耐量异常,血清胰岛素水平升高,葡萄糖激酶活性升高,结果证实模型鼠肝组织中葡萄糖激酶蛋白表达随着年龄增加有升高的趋势,但没有显著性差异,胰岛素受体表达随着小鼠年龄增加显著性增加。通过姆椒ǎ醪秸业鲈苣P褪蟊泶锒周模型鼠不构建的肝脏特异性基因敲除小鼠模型基因表达特征稳定,符合糖尿病检测标准。随着年龄的增加,模型小鼠的生物学和分子生物学指标有所变化。在芎芰阶槟P托∈笾姓业交虮泶锏牟钜炱危但该基因是否与吞悄虿》⒉』朴泄兀褂写诮徊降难芯浚备没蚴欠窨以成为降糖药物的作用新靶点也还需进一步的实验证实。关键词抑制性消减杂交葡萄糖激酶基因敲除目的表达或低表达的基因,鉴定克隆并测序。结论
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芎蹽蚯贸∈蟾卧嗷虮泶锊钜斓难芯本课题组采用猯跫曰虼虬屑际跣卩螶,构建了一种糖尿病动物模型一糖尿病是一种慢性内分泌代谢性疾病,近年来发病率不断上升,引起多种并发症,严重危害人类健康,但是糖尿病的病因及发病机制尚未完全阐明,糖尿病的防治已成为科学工作者的一个重要课题‘俊从患者中得到的研究材料受到诸多因素制约,需要利用糖尿病动物模型来进行一些基础性研究。目前获得糖尿病动物模型常用的方法有两大类:实验性动物模型妥苑⑿远锬P蚠青少年期发病的成年型糖尿病猳琈是一组高度异质性单基因遗传病⋯,以往人们认为它是吞悄虿的特殊亚型,现将之归为特殊类型糖尿病。目前已经发现了霰冉厦魅返幕蛴隡Ⅳ发病有关啊F咸烟羌っ珿是己糖激酶琀家族中的一员,存在于肝脏细胞和胰岛赴冢妹复呋咸烟亲;一磷酸葡萄糖,是葡萄糖代谢的第一个关键限速酶薄浚彩翘窃铣傻那疤幔珿蛲槐淠艿贾翸的发生,活性降低可导致胰岛素分泌不足与葡萄糖代谢紊乱啪”。肝脏特异性葡萄糖激酶基因敲除小鼠模型‘矧,并通过了生物学、分子生物学特征及稳定性评价。本实验旨在采用抑制性消减杂交技术【”圳对基因敲除小鼠做进一步研究,考察基因敲除对小鼠肝脏基因表达差异的影响。”
臣巫圈嚼亟困旷——————可—————。由苤直匿堂瞳堡主堑塞生堂焦迨塞焕生笛椴牧实验动物:基因敲除小鼠为北京大学医学部基础医学院药理系分子药理研究室构建;饲养条件:北京大学医学部实验动物部分组:选取年龄不同的基因敲除小鼠,分别为堋周、芎埽参K淖槟P褪蟆主要试剂:胰岛素含量试剂盒,原子高科股份有限公司;銸,;籒,主要仪器:低温高速离心机,晃⒘刻ㄊ礁咚倮胄幕琀;牵琓王心匹;电泳仪,猂;垂直电泳槽,荒撼上穹治鱿低常珺—痪艿缱臃治鎏炱剑琒蛔贤夥止夤舛燃疲坏臀卤洌琒;恒温水浴箱,;恒温金属浴,杭州博日科技有限公司;磁力加热搅拌器,凰岫燃疲珺;血糖仪,;涡旋混合器,;恒温振荡器,太仓市科教仪器厂;手提式灭菌器,上海申安医疗器械厂。技术路线妒