蛋白质的分离提取方法.ppt

蛋白质的分离提取方法
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体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
1、主要概念：①凝胶色谱法 ②电泳法 ③缓冲溶液 ④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。
2、主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理 ②电泳法分离样品的原理 ③缓冲溶液的组成和作用机理
3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法
4、课题难点：①样品的预处理 ②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
学习目标
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一、凝胶色谱法（分配色谱法）
根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。
大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。
⑴.概念：
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⑵.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程
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⑶.凝胶色谱法的原理—分子筛效应：
当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
▲依据的特性是：蛋白质分子量的大小。
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凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
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二、缓冲溶液
:
在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液pH值基本保持不变的混合溶液。
：
H2CO3 —— NaHCO3、CH3COOH —— CH3COONa
NaH2PO4 —— Na2HPO4、KH2PO4 —— K2HPO4

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在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
琼脂糖凝胶电泳示意图
⑴.概念：
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
三、电泳：
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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
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⑵.电泳原理：
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
⑶.常见电泳类型：
①琼脂糖凝胶电泳
②聚丙稀酰胺凝胶电泳
③SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小、形状。
电泳迁移率完全取决于分子的大小。
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