各种培养基的制作方法.pdf

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蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡
萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。




水100毫升
~
在烧杯中加水,称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl,加热溶化后,~。分
装,加棉塞,高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。

在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。

牛肉500克
蛋白胨10克
NaCl克5
~
取新鲜牛肉500克,去净脂肪、筋腱后,绞碎或剁碎,加水1000毫升浸泡,15℃下放
置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤,补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食
盐。将肉汁加热,放入苏打(碳酸钠)至红色,调整pH值。分装,高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白,质制成液体培养基,如需制成固体培养
基,可在每100毫升液体中加入2克琼脂,加热溶化后,分装,再次进行高压蒸汽灭菌。常
用于培养细菌。
(淀粉琼脂培养基)
可溶性淀粉2克

24
MgSO·
42

3


4
琼脂2克
水100毫升
pH~
在烧杯中加水95毫升,加热至沸腾,取可溶性溶粉2克,用5毫升水调成糊状,倒入
沸水中和匀。再称取其它药品,陆续加入烧杯内(待一种药品溶解后,再加入第二种药品)。
待全部药品溶解后,停止加热,补足失水,~。分装后,高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。

马铃薯200克
蔗糖10克
琼脂20克
水1000毫升
自然pH
称取200克马铃薯片,加水1000毫升,煮沸半小时,用纱布过滤,补足失水。在上述
滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂,加热使琼脂熔化。分装后,高压蒸汽灭菌。常用于培养
酵母菌。

将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁,装入锥形瓶中,加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养
酵母菌。

NaNO2克
3
KHPO1克
24


4

4
蔗糖30克
琼脂15~20克
水1000毫升
自然pH
分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。
(或蔗糖)培养基
黄豆芽100克
葡萄糖50克
琼脂15克
水1000毫升
称取新鲜黄豆芽100克,放入烧杯中,加1000毫升水,煮沸30分钟,用纱布过滤,补
足失水。再加葡萄糖(或蔗糖)50克,琼脂15克,加热至融化,补足失水。分装,加棉塞,
高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。
(E、M、B培养基)
乳糖10克
蛋白胨5克
NaCl克5
KHPO2克
24
2%伊红水溶液20毫升
%美蓝水溶液20毫升
琼脂20克
水1000毫升


向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶
解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应
在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加
热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。

用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,
可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用
滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。

已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果
要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取
培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每
只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只
20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为
宜。

分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。
棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指
与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成
1个长棒形的棉塞。棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以
防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合
适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应
盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。

培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。
将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点
燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培
养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。铺放培
养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱
里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物。
改良的Fries氏液体培养液:蔗糖30g、酒石酸铵5g、、KH2PO41g、
MgSO4·、、、蒸馏水1000mL